Л.М. Гусейнова, А.М. Рашидова, А.Н. Фараджев ВЛИЯНИЕ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА АКТИВНОСТЬ ПИРУВАТКИНАЗЫ КОРЫ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА БЕЛЫХ КРЫС В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ (С. 33-38)

Л.М. Гусейнова1, А.М. Рашидова2, А.Н. Фараджев1
ВЛИЯНИЕ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА АКТИВНОСТЬ ПИРУВАТКИНАЗЫ КОРЫ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА БЕЛЫХ КРЫС В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
1Азербайджанский Государственный Педагогический Университет, Баку, Азербайджан
2Институт Физиологии им. А.И. Караева НАНА, Баку, Азербайджан
1Azerbaijan State Pedagogical University, Baku, Azerbaijan
2Azerbaijan National Academy of Sciences, Institute of Physiology N.A. A.I. Karayev, Baku, Azerbaijan
afag@mail.ru

ВЛИЯНИЕ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА АКТИВНОСТЬ ПИРУВАТКИНАЗЫ КОРЫ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА БЕЛЫХ КРЫС В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
Л.М. Гусейнова, А.М. Рашидова, А.Н. Фараджев
Исследовали влияние неионизирующего электромагнитного излучения (ЭМИ) разных интенсивностей и гипоксии на активность фермента пируваткиназы (ПК, КФ 2.7.1.40) в тканях коры правого и левого полушария головного мозга белых крыс в постнатальном онтогенезе. Выявлена, в основном, выраженная гиперактивность фермента ПК в коре левого полушария головного мозга как в контроле, так и после воздействия экстрим-факторов среды. Установлено, что наиболее резкие изменения динамики активности ПК в тканях коры больших полушарий головного мозга происходят под воздействием гипоксии, нежели ЭМИ, что приводит также к изменению связанного с ней энергообеспечения мозга. Предполагается, что изменения активности ПК вызваны включением в энергоснабжение клеток продуктов распада и активацией биосинтетических процессов.
Ключевые слова: межполушарная асимметрия, кора больших полушарий, пируваткиназа, неионизирующее электромагнитное излучение, гипоксия, активность фермента, белые крысы.

Введение. Одной из важнейших проблем современной нейробиологии является межполушарная асимметрия мозга. В настоящее время имеющиеся данные в мировой литературе дают возможность определить различную роль каждого из полушарий в формировании и обеспечении психической деятельности человека, в реализации речевых и неречевых процессов [2,9]. Функционирование ЦНС в условиях действия различных экстремальных факторов является предметом изучения современных биохимических и физиологических исследований [6]. Интересным направлением представляется изучение воздействия стресс- факторов среды на кору больших полушарий головного мозга. В качестве модели были избраны изменение активности одного из ферментов энергетического метаболизма мозга — фермента пируваткиназы (ПК; КФ 2.7.1.40), коры больших полушарий головного мозга при гипоксии и неионизирующей радиации разной интенсивности. Известно, что проблема воздействия стресс-факторов среды, типа неионизирующего облучения и гипоксии, вставшая перед экологами уже достаточно давно, переживает новый этап из-за всё большего развития высоких технологий [3]. Однозначно, что одной из проблем современной физиологии является изучение роли метаболических защитных систем при воздействии на организм экстремальных факторов среды. Актуальность этих исследований диктуется как фундаментальными проблемами общей адаптации организма к экстрим-факторам среды, так и прикладными аспектами, связанными с медициной, биотехнологией и т.д. [1].

Целью работы было исследование особенностей динамики изменения активности пируваткиназы коры правого и левого полушария головного мозга под воздействием экстрим — факторов среды в зависимости от возраста и в соответствии с этим авторами решалась задача изучения фермента энергетического обеспечения мозга пируваткиназы (ПК) на уровне гликолитического процесса [2].

Материалы и методы. Исследования проводились на белых крысах-самцах 3-х возрастных групп: 3-; 6- и 12-месячных в соответствии с биоэтическими принципами и нормативными документами, рекомендованными Европейским научным фондом и Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным. Согласно поставленным в работе условиям, все животные подразделялись на 3 группы: I группа – контрольные, содержавшиеся в стандартных условиях вивария; II группа – опытные крысы, подвергнутые воздействию неионизирующего электромагнитного излучения (ЭМИ) разной интенсивности; III группа — опытные крысы, помещавшиеся в барокамеру по соответствующей возрастной группе при свободном доступе к атмосферному воздуху, подвергавшиеся воздействию гипоксии в постнатальном онтогенезе. Нужно отметить, что II группа, согласно условиям эксперимента, сама была разделена на 2 подгруппы – первая подвергалась излучению с плотностью энергопотока 10 mkV/sm2 , а вторая — с плотностью энергопотока 30 mkV/sm2.

ЭМИ проводилось каждый день по 20 минут в течение 10 дней при низкоинтенсивном (плотность энергопотока 10 mkV/sm2) и высокоинтенсивном (плотность энергопотока 30 mkV/sm2) режимах на физиотерапевтическом приборе «Волна-2».

При гипоксии опытные животные в течение 5 дней помещались на 20 минут в камеру, куда подавалась газовая смесь, состоящая из 95% азота и 5% кислорода.

После окончания каждого опыта животных декапитировали в условиях гипотермии, извлекали мозг, обрабатывали холодным физиологическим раствором и дифференцировали необходимый для эксперимента отдел мозга [7]. Ткани гомогенизировали с помощью гомогенизатора с тефлоновым пестиком в растворе 0,2 М трис-НСl б. (рН 7,4); 1 мМ ЭДТА; 0,25М сахарозы в соотношении 1:9. Гомогенаты ткани центрифугировали на рефрижераторной центрифуге К-24 (Германия) при 900 g в течение 10 минут [5]. Удалив обрывки ткани и ядра, супернатант для дальнейших исследований разводили в соотношении 1:10 раствором 0,32 М сахарозы. Все процедуры проводились при температуре 0-40 С.

Активность ПК определяли спектрофотометрически при λ=340 нм и 250С с помощью лактатдегидрогеназы в качестве индикаторного фермента по мере окисления НАДН по методу Bergmeyer H.U. [10].

Эта реакция идет слева направо, вследствие большой отрицательной величины свободной энергии гидролиза ацилфосфатной связи. Инкубационная смесь для определения активности фермента содержала: 0,1 М трис-НС1 б. (рН 7,6); 50 мМ MgSO4 / 0,2 М КС1; 10 мМ ФЭП; 94 мМ АДФ; 12 мМ НАДН; 450 U /mg ЛДГ, в конечных концентрациях. Количество белка определяли по методу Бредфорда [8]. Полученные результаты статистически обработаны [4].

Результаты и обсуждение. Энергетический метаболизм в головном мозге отличается высокой реактивностью и играет важную роль в адаптации функционального состояния организма в целом. Энергетический баланс головного мозга на 80% удовлетворяется расщеплением глюкозы в процессе гликолиза [11]. Важная роль в этом процессе принадлежит ферменту пируваткиназа (КФ 2.7.1.40), изучение изменения динамики активности которой под воздействием стресс-факторов представляет определенный интерес [6].

Вызывает большой интерес воздействие на живой организм неионизирующего облучения при радио- и микроволновых диапазонах. Это, прежде всего, вызвано расширением сфер деятельности и подверганию людей различным облучениям. Если только учесть, насколько в быт людей внедрилась один из элементов технологической инфраструктуры – мобильная связь (900 – 1800 МГц), глобальность возникшей проблемы очевиден [1]. Широко обсуждается влияние ЭМИ на биологические системы, как возможного механизма воздействия на ферменты, участвующих в энергетическом метаболизме.

Результаты проведенных нами исследований показали, что в контрольной группе животных, содержащихся в обычных условиях вивария, общая активность пируваткиназы в коре левого полушария головного мозга в основном выше, чем в правом, и только в группе 6-месячных крыс была обратная картина – на 38% ниже, чем активность фермента в правом полушарии. Удельная же активность в каждой конкретной возрастной группе показало превышение активности в правом полушарии по сравнению с левым на 26% (у 6-месячных крыс) и 34% (у 12-месячных крыс), в группе 3-месячных животных было на уровне контроля (табл.1,2).

Во 2-ой группе животных, подвергшихся ЭМИ при низкоинтенсивном (плотность энергопотока 10 mkV/sm2) и высокоинтенсивном (плотность энергопотока 30 mkV/sm2) режимах, общая активность пируваткиназы во всех возрастных группах была почти однозначна, то есть в левом полушарии была выше, чем в правом, исключение составили животные 6-месячного возраста – на 25% ниже, чем в правом полушарии при 10 mkV/sm2, и в 4 раза выше при 30 mkV/sm2. Удельная же активность менялась неоднозначно: у 3-месячных животных при 10 mkV/sm2 активность ПК в левом полушарии головного мозга крыс была в 3 раза выше, а при 30 mkV/sm2 снижена на 75,4%; у 6-месячных при низкоинтенсивном (плотность энергопотока 10 mkV/sm2) излучении активность ПК была на идентичном уровне с показателями активности фермента в правом полушарии, в то время, как при 30 mkV/sm2 была в 3, 5 раза выше показателей в правом полушарии; у 12-месячных – показатели немного повышены по сравнению с правым полушарием.

В 3-ей группе животных, подвергшихся антенатальной гипоксии, общая активность ПК в левом полушарии головного мозга во всех 3-х группах животных была снижена по сравнению с правым на 23-56%, исключение составили животные 12-месячного возраста – тут они были на уровне нормы. Удельная активность же имела другую картину – при повышении активности фермента в группе 3- и 12-месячных животных, наблюдалось снижение в группе 6-месячных животных на 43%. Все эти значения статистически достоверны (уровень значимости p <0,001; p>0,01).

Таблица 1. Влияние ЭМИ разной интенсивности и гипоксии на общую активность пируваткиназы (нмоль НАДН/мин, при λ =340 нм, 25о С) ткани коры больших полушарий головного мозга белых крыс-самцов 3-, 6- и 12-месячного возраста (М±m; n=12)

Условия эксперимента Контроль Электромагнитное излучение Гипоксия
10 mkV/sm2 30 mkV/sm2
R L R L R L R L
3-месячн. 318.1±10 365.8±11

115*

336.3±8

105.7** >0,25

363.5±0.2

108.1*

99.4** >0.05

599.8±16

188.6** <0.001

668.1±25

111.4*

182.6** <0.001

368±21

115.7** >0.05

286.3±14

77.8*

78.3**

>0.05

6-месячн. 554.4±20 343.1±16

61.9*

309.1±12

55.8** <0.001

231.7±9.7

75*

67.5** <0.001

354.4±14

63.9** <0.001

1513±47.3

427*

441** <0.001

259±12

46.7** <0.001

112.4±8

43.4*

36.8** <0.001

12-месячн. 329.4±12 672.5±31

204.1*

259.0±7

78.6** <0.001

363.5±11

140.4*

54.05** <0.001

395.3±16

120** <0.001

518±22.5

131*

77.03** <0.001

129.3±9

39.3** <0.001

125.1±8

96.8*

18.6** <0.001

Условия эксперимента Контроль Электромагнитное излучение Гипоксия
10 mkV/sm2 30 mkV/sm2
R L R L R L R L
3-месячн. 4,9±0,16 4,57±0,14

93,3*

1,68±0,4

342,9**

<0,001

5.2±0.2

309.5*

113.8** >0.02

19.9±0.54

406.1** <0.001

4.9±0.2

24.6*

107.2**

>0.25

3.68±0.21

75.1** <0.001

5.7±0.3

154.9*

124.7** <0.001

6-месячн. 2,2±0,08 1,63±0,07

74,1*

3.25±0.13

147.7** <0.001

3.22±0.13

99.1*

197.6** <0.001

2.73±0.1

124.1** <0.001

9.5±0.3

347.9*

582.8**

<0.001

1.04±0.05

47.3** <0.001

0.59±0.01

56.7*

36.2** <0.001

12-месячн. 2,9±0,1 1,98±0,09

68,3*

7.4±0.2

255.2** <0.001

8.08±0.3

109.2*

408.1** <0.001

4.54±0.18

156.6** <0.001

5.18±0.23

114.1*

261.6** <0.001

0.34±0.02

11.7** <0.001

041±0.03

120.6*

20.7** <0.001

  1. Активность пируваткиназы в коре больших полушарий головного мозга белых крыс в постнатальном онтогенезе как в контроле, так и после воздействия неблагоприятных факторов среды, в данном случае ЭМИ и гипоксии, различна: в левом она гораздо выше, чем в правом.
  1. Наиболее резкие изменения в активности ПК головного мозга происходят после воздействия гипоксии, нежели ЭМИ.
  1. Различие активности фермента пируваткиназы в коре больших полушарий головного мозга после воздействия неблагоприятных факторов среды зависит от возраста животных — чем взрослее животное, тем менее устойчиво к воздействию ЭМИ и гипоксии.

Примечание (здесь и далее):

1)*-% от активности пируваткиназы в правом большом полушарии головного мозга;

** -% от значения активности пируваткиназы в контроле в идентичном большом полушарии головного мозга.


Таблица 2. Влияние ЭМИ разной интенсивности и гипоксии на удельную активность пируваткиназы (нмоль НАДН/мин/мг белка, при λ =340 нм, 25о С) ткани коры больших полушарий головного мозга белых крыс-самцов 3-, 6- и 12-месячного возраста (М±m; n=12)

Сравнивая показатели общей активности ПК опытных групп с контрольной, можно заметить, что общая активность в коре обоих полушарий головного мозга животных 3-месячного возраста или на уровне контрольных значений, или же повышены в 1,8 раза, и лишь при гипоксии в левом полушарии наблюдалось снижение активности ПК на 22,3%.

С возрастом наблюдается снижение резистентности мозга к воздействию стресс-факторов, исключение составила активность ПК в левом полушарии 6-месячных крыс при 30 mkV/sm2, где превышала контрольные значения почти в 4,5 раза. В то же время, наименьшее снижение активности наблюдалось в левом полушарии 12-месячных крыс при гипоксии, где почти в 5 раз было ниже активности ПК в контроле.

Удельная активность ПК при ЭМИ превышала контрольные значения в несколько раз во всех возрастных группах. Но при гипоксии наблюдалось резкое снижение активности ПК, и особенно это проявлялось в группе 12-месячных крыс в правом полушарии.

В заключение можно сказать, что ПК, как важнейший гликолитический фермент, участвующий в реакции субстратного фосфорилирования АДФ, помимо тканевой специфичности отличается своими регуляторными свойствами и особенностями биокатализа, активно участвуя в реализации механизма адаптации и развития приспособительно-компенсаторных процессов в ЦНС при воздействии стресс-факторов, в данном случае электромагнитного излучения и гипоксии.

Как видно из полученных нами данных, при ЭМИ в обоих режимах интенсивности активность ПК выше в левом полушарии, что свидетельствует о более высоком уровне обмена в левом полушарии [9]. В то же время, общая активность ПК у 6-месячных крыс при 10 mkV/sm2 и удельная активность ПК при 30 mkV/sm2 у 3-месячных была ниже контроля. Такую динамику изменения активности ПК можно считать адаптационно-компенсаторной для уравновешивания энергетического баланса мозга в экстрим — ситуациях среды.

Выводы:

  1. Активность пируваткиназы в коре больших полушарий головного мозга белых крыс в постнатальном онтогенезе как в контроле, так и после воздействия неблагоприятных факторов среды, в данном случае ЭМИ и гипоксии, различна: в левом она гораздо выше, чем в правом.
  2. Наиболее резкие изменения в активности ПК головного мозга происходят после воздействия гипоксии, нежели ЭМИ.
  3. Различие активности фермента пируваткиназы в коре больших полушарий головного мозга после воздействия неблагоприятных факторов среды зависит от возраста животных — чем взрослее животное, тем менее устойчиво к воздействию ЭМИ и гипоксии.

Список литературы:
  1. Баньков В.И. Электромагнитные информационные процессы биосферы. Екатеринбург, 2004.
  2. Боголепова И.Н., Малофеева Л.И. Основные принципы структурной асимметрии корковых формаций мозга человека// Успехи физиологических наук, 2004, том 35, №3,с. 3-19.
  3. Вакуленко О.В., Григорьева О.О., Даценко А.И. Люминисцентный контроль функционального состояния Vallisneria spiralis L., облученной микроволновой радиацией.// Радиационная биология. Радиоэкология, 2010, т.50, №2, с. 211- 216
  4. Лакин Г.Ф. «Биометрия», Москва, «Наука», 1990, 352 с.
  5. Осадчая Л.М. Свободные аминокислоты нервной системы. Кн. Биохимия мозга. Изд-во С.-П. Ун., 1999,с.29-58.
  6. Рашидова А.М. Влияние паров летучих фракций сырой нефти на активность пируваткиназы мозга. Тр. Ин-та физиологии им. А.И. Караева НАНА. Проблемы физиологии и биохимии. Баку, 2007, т.XXV, c.255-262.
  7. Светухина В.М. Цитоархитектоника новой коры мозга в отряде грызунов.// Архив анатомии, эмбриологии и гистологии. 1968, 42, №2, с. 31-45
  8. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А. и др. Практикум по общей биохимии, Москва, «Просвещение, 1982, с.78.
  9. Фокин В.Ф., Пономарева Н.В. Динамические характеристики функциональной межполушарной асимметрии.// Функциональная межполушарная асимметрия. Хрестоматия. Под ред. Н.Н.Боголепова, В.Ф. Фокина. М.; Научный мир, 2004, 728 с.
  10. Bergмейеr H.U., Methods of Enzymatic Analysis, Verlag Chemie, Weinheim, 1973
  11. Luc Pellerin and Pierre J.Magistretti. How to balance the brain energy budget while spending glucose differently. J. Physiology, 2003, 546, 2, p.325.
                      Комментарии и пинги к записи запрещены.

                      Комментарии закрыты.

                      Дизайн: Polepin